四.电泳实验

1. 在琼脂糖电泳中,DNA电泳Marker分离不明显怎么办?

1)琼脂糖浓度以及质量:Marker跑不开一般是指的大片段,目前常用1%琼脂糖凝胶,具体使用需要根据自己片段大小选择,一般大片段用低浓度胶,小片段选择高浓度胶

凝胶

浓度

0.5%

0.7%

1%

1.2%

1.5%

2%

DNA长度

1000bp ~30kb

800bp ~12kb

500bp ~10kb

400bp ~7kb

200bp ~3kb

50bp ~2kb

2)电泳时间:指示剂4/5处较好,大片段可适量延长时间

3)电泳电压:低浓度胶电压应选择适当降低,普通电泳应该在80V~100V之间。

2. 琼脂糖凝胶电泳的TAE缓冲液和TBE缓冲液的利弊?

缓冲液作用是维持合适的pH。正负极都会发生氧化还原反应,长时间的电泳将使正极变酸,负极呈碱性。缓冲系统溶液使两极的pH保持基本不变。TAE缓冲液对大于13kb 的片段分离效果好,可用于回收 DNA 片段。但不适用于长时间电泳。而TBE缓冲液的缓冲能力较TAE缓冲液强,适合长时间电泳。但TBE缓冲液含有硼酸成分影响DNA回收效率以及后续的酶反应。



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