四.电泳实验

1. 在琼脂糖电泳中，DNA电泳Marker分离不明显怎么办？

（1）琼脂糖浓度以及质量：Marker跑不开一般是指的大片段，目前常用1%琼脂糖凝胶，具体使用需要根据自己片段大小选择，一般大片段用低浓度胶，小片段选择高浓度胶；

（2）电泳时间：指示剂达4/5处较好，大片段可适量延长时间；

（3）电泳电压：低浓度胶电压应选择适当降低，普通电泳应该在80V~100V之间。

2. 琼脂糖凝胶电泳的TAE缓冲液和TBE缓冲液的利弊？

缓冲液作用是维持合适的pH。正负极都会发生氧化还原反应，长时间的电泳将使正极变酸，负极呈碱性。缓冲系统溶液使两极的pH保持基本不变。TAE缓冲液对大于13kb 的片段分离效果好，可用于回收 DNA 片段。但不适用于长时间电泳。而TBE缓冲液的缓冲能力较TAE缓冲液强，适合长时间电泳。但TBE缓冲液含有硼酸成分影响DNA回收效率以及后续的酶反应。