DH5a感受态细胞

货号:CC1001

规格100 μL×10

产品简介:

DH5α感受态细胞是采用大肠杆菌DH5α菌株经特殊工艺制备得到,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达108-109-80℃保存3-5个月转化效率不发生改变。

基因型:supE44lacU169φ80 lacZM15hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

保存条件:

-80 ℃保存,一年有效。

使用说明:(以下操作均按无菌条件的标准进行)

1. 将感受态细胞置于冰上融化,以下实验以100 μL感受态细胞为例。

2. 向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA,注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一,轻轻旋转离心管以混匀内容物,冰浴放置30分钟。

3. 将离心管置于42 ℃水浴中60-90秒,然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟,注意不要摇动离心管。

4. 向离心管中加入500 μL无菌无抗的SOCLB培养基,37℃ 180rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。

5. 取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOCLB平板,37℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整,如转化的DNA总量较多,可取100 μL左右的转化产物涂板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300 μL的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少,可通过离心后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4 ℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项:

1. 感受态细胞应保存在-80 ℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。

2. 实验过程中应严格无菌操作,防止其它DNA或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3. 转化时,转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4. 转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5. 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到最低。


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