磷酸钙转染试剂

EC1001

产品简介:

磷酸钙转染试剂可广泛应用于哺乳细胞转染。与经典磷酸钙转染方法相比,降低了毒性并一定程度上提高了转染效率。使用磷酸钙法转染细胞,同时适用于瞬时转染和稳定筛选细胞株。可用于转染293细胞、CHO细胞、Hela细胞等。

包装清单:

产品编号

产品名称

包装

EC1001-1

氯化钙溶液

20 mL

EC1001-2

HBS溶液

20 mL

说明书

1

适用范围:适用于多种细胞的贴壁和悬浮转染。

保存条件:

-20保存,一年有效。

使用说明:

1. 对于贴壁细胞:

a) 将细胞培养于培养皿或培养板内,通常在铺板后1~2天至50~70%汇合度为宜。后续说明都按6孔板内一个孔进行说明,如果有更多个孔或大小不相同的培养器皿,请自行换算;
b) 在转染前30~60分钟,吸去细胞培养液,加入新鲜的不含抗生素的无血清培养液2 mL
c) 2 μg待转染的质粒DNA (质粒总体积不宜超过20 μL),加入到250 μL氯化钙溶液中;
d) DNA-氯化钙溶液加入到250 μL HBS溶液中混匀,室温孵育10分钟。此时不会产生可见的沉淀;
e) DNA-氯化钙HBS混合物均匀滴加到整个6孔板内。在含5%CO237℃细胞培养箱内培养;
f) 根据实验要求和磷酸钙对于不同细胞的毒性不同,在3~6小时后轻轻晃动培养板数次以充分悬浮一些磷酸钙沉淀,吸去含磷酸钙沉淀的培养液,加入2 mL新鲜的完全培养液,继续培养;
g) 通常在转染约24小时后就可以检测到转染基因的表达。
2. 对于悬浮细胞:
a) 离心收集悬浮细胞,用PBS洗涤一次;
b) 按照上面的步骤c)d)制备DNA-氯化钙-HBS混合物;
c) 106个细胞的沉淀,用25 μL DNA-氯化钙-HBS混合物重新悬浮,室温放置20分钟;
d) 在一个6孔板孔内加入2 mL完全培养液,然后加入来自上一步的细胞-DNA-氯化钙-HBS混合物,混匀;
e) 在含5% CO237℃细胞培养箱内培养;
f) 根据实验要求和磷酸钙对于不同细胞的毒性不同,在4~16小时后离心收集细胞,用PBS洗一次,然后用2 mL细胞悬浮培养液重新悬浮细胞,继续培养;
g) 通常在转染约24小时后就可以检测到转染基因的表达。

注意事项:

1. 高纯度的质粒是获得高转染效率的必要条件,要确保A260/A280 >1.8;

2. 转染前细胞必须处于良好的生长状态,在指数生长期转染可以实现最佳转染效率;

3. 转染时,把DNA-氯化钙溶液加入到HBS溶液中,不要把HBS溶液加入到DNA-氯化钙溶液中;

4. HBS溶液的pH值直接关系到转染效率,尽量避免把HBS溶液长时间暴露在空气中,以免被空气中的CO2酸化。

5. 转染时由于质粒不同、细胞不同,最佳的质粒用量需自行摸索。


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