哺乳动物细胞蛋白瞬时表达与纯化

服务编号:GP1004

服务简介:

哺乳动物细胞自身具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能,在活性方面更接近于天然蛋白质,因此,选择哺乳动物细胞蛋白表达系统表达高质量的重组蛋白,用于生物制药学、重组蛋白药物和诊断原料试剂盒的开发及应用等。经典的建立稳定细胞系生产重组蛋白的过程复杂冗长,哺乳动物细胞瞬时蛋白表达系统,通过瞬时转染将表达质粒转入宿主细胞表达目的蛋白,宿主细胞通常可在转染后2~14天内持续表达重组蛋白,滴度可达数十毫克。瞬时表达系统中最常用的哺乳动物细胞为CHO细胞系和HEK293细胞系。本公司自主研发的CHO细胞系和HEK293细胞系无血清无蛋白培养基,活细胞密度高达18~25×106cells/mL,优于国际知名公司同类产品。

服务内容

1.目的蛋白基因密码子优化:以客户的基因序列翻译的蛋白序列为源模板,通过密码子优化基因序列,提高蛋白表达量

2.表达载体构建:推荐客户使用本公司自主研发载体进行实验,利用载体自带的信号肽序列使目的蛋白分泌表达至胞外;添加6×His-Tag便于重组蛋白检测和纯化

3.细胞瞬时转染:根据实验需求选择合适的细胞系(CHO细胞系或HEK293细胞系),转染细胞24~72 h

4.蛋白表达及纯化:瞬时转染细胞后,使用自主研发无血清培养基悬浮培养细胞至对数生长期,收集细胞上清,Western blot检测蛋白表达。确认蛋白表达后,使用Ni-resin亲和纯化检测

5.扩大培养体系:扩大细胞培养体系至200 mL,使用全自动AKTA蛋白纯化仪获得目的蛋白样品。

服务说明

1. 主要用于CHO细胞、HEK293细胞系

2由于翻译后的加工不完全相同,不同表达系统产生的重组蛋白的生物学活性和免疫原性会有差别

3. 本项目具体实施方案可以根据客户需求进行订制。

 


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