哺乳动物细胞蛋白稳定表达与纯化

服务编号:GP1005

服务简介:

哺乳动物细胞自身具备蛋白折叠和翻译后修饰的功能,在活性方面更接近于天然蛋白质,因此,选择哺乳动物细胞蛋白表达系统表达高质量的重组蛋白,用于生物制药学、重组蛋白药物和诊断原料试剂盒的开发及应用等。目前70%以上的重组蛋白药物产品由哺乳动物细胞表达系统获得。哺乳动物细胞稳定蛋白表达系统,通过将表达载体转入宿主细胞,载体自身和细胞自身基因组发生整合;由于载体整合到细胞基因组是一个相对随机的过程,在其重组后根据筛选标记对转染后细胞系进行加压筛选,筛选出能够稳定表达目的蛋白的细胞株。经过成功筛选的稳定细胞株可以直接扩大培养,用来大量生产目的蛋白。最常用的哺乳动物细胞表达系统为CHO细胞系和HEK293细胞系。本公司自主研发的CHO细胞系和HEK293细胞系无血清无蛋白培养基,活细胞密度高达18~25×106cells/mL,优于国际知名公司同类产品。

服务内容

1.目的蛋白基因密码子优化:以客户的基因序列翻译的蛋白序列为源模板,通过密码子优化基因序列,提高蛋白表达量

2.表达载体构建:推荐客户使用本公司自主研发载体进行实验,利用载体自带的信号肽序列使目的蛋白分泌表达至胞外;添加6×His-Tag便于重组蛋白检测和纯化

3.细胞稳定转染及筛选:根据实验需求选择合适的细胞系(CHO细胞系或HEK293细胞系),转染细胞24~72 h后,根据筛选标记对转染后细胞系进行加压筛选,筛选出能够稳定表达目的蛋白的cell pool

4.蛋白表达及纯化:使用自主研发无血清培养基悬浮培养cell pool至对数生长期,收集细胞上清,Western blot检测蛋白表达。确认蛋白表达后,使用Ni-resin亲和纯化检测

5.扩大培养体系:扩大细胞培养体系至200 mL,使用全自动AKTA蛋白纯化仪获得目的蛋白样品。

服务说明

1. 主要用于CHO细胞、HEK293细胞系

2由于翻译后的加工不完全相同,不同表达系统产生的重组蛋白的生物学活性和免疫原性会有差别

3. 本项目具体实施方案可以根据客户需求进行订制。


[营业执照]   版权所有Copyright © 2019-2021 河南普诺易生物制品研究院有限公司

客户服务热线

0373-2058988

17737369691

19836237919

在线客服