重组蛋白技术服务

普诺易生物研究院专业致力于重组蛋白表达,为客户提供高质量、活性高的重组蛋白,包括各类重组抗体、细胞因子、生长因子、酶、激素等。 普诺易生物拥有先进的蛋白表达技术和丰富的蛋白表达经验,拥有自主独立的表达系统知识产权,能完成常规条件下不能表达的各类复杂、活性低、表达量低的重组蛋白制备。 迄今为止,普诺易生物已经完成1000多组各类蛋白重组表达。

公司优势:

拥有核心知识产权自主开发的蛋白表达系统,包括高效表达载体、培养基配方、细胞系。

成功率高:实验成功率高达98%以上;

活性高:能够根据客户要求进行设计、表达蛋白,表达的蛋白活性高;原核表达保证可溶性、哺乳动物细胞活性更高;

高纯度:四大蛋白纯化方法,结合AKTA蛋白纯化系统,可获得纯度>95%的高纯度蛋白。

零风险:不成功不收费,客户风险降低到最低。

一站式服务:只要提供基因序列,普诺易生物完成基因合成/克隆、载体构建、蛋白表达,抗体制备等一站式服务。

重组蛋白表达系统

重组蛋白有很多用途,如抗原制备、药物靶点研究、酶学分析、蛋白晶体结构分析、蛋白相互作用。当前生产重组蛋白主要有四大表达系统:原核表达系统、酵母细胞表达系统、昆虫细胞蛋白表达系统以及哺乳动物细胞系统,各类表达系统的优缺点见下表。

各类重组蛋白表达系统的优缺点

表达系统 代表菌株/细胞系 优点 缺点 表达水平
大肠杆菌 BL21/pET系统 遗传背景清楚;繁殖快、成本低、抗污染能力强;表达量高、分离纯化相对简单、稳定性好;商品化的载体和菌株种类齐全、适用范围广等。 没有真核转录后/翻译后加工功能;不能进行糖基化、磷酸化等修饰,难以形成正确的二硫键配对和空间构像折叠;表达的蛋白质常是不溶的,聚集成包涵体;产生一些致热源(内毒素),本身含有内毒素和有毒蛋白。 重组蛋白占细菌总蛋白量:胞内表达10%~70%,胞外表达0.3%~4%。
酵母 毕赤酵母属(Pichia)、汉森酵母属(Hansenula)、球拟酵母属(Torulopsis)等,以毕赤酵母属应用最多。 生长繁殖快,成本较低、遗传稳定。毕赤酵母可进行细胞高密度培养,且分泌到培养基中的蛋白很少,因此纯化方便。 表达量低、发酵时间长;不正确的糖基化。培养上清多糖浓度高,不利于纯化。 重组蛋白占菌体总蛋白量:10%~30%。
昆虫杆状病毒系统 病毒:AcNPV、BmNPV
昆虫:sf9细胞
正确的蛋白折叠、二硫键的配对及PTM;表达水平高;可容纳大分子的插入片段;能同时表达多个基因。 重组蛋白表达处于极晚期病毒启动子的调控下,由于病毒感染,细胞开始死亡。 重组蛋白含量:1~500mg/L。
哺乳动物细胞 CHO、HEK293、COS、BHK、SP2/0、NIH3T3等细胞。 具备PTM,活性方面更接近于天然蛋白质。适合表达完整的大分子蛋白。 培养基成本高、周期长、培养困难,表达量较低。
操作技术要求高,易发生病毒、支原体感染。
重组蛋白含量:0.2~300mg/L。
重组抗体可达g/L水平。