二.细胞培养

1. 胰酶消化细胞过度，导致细胞状态变差怎么办?

当消化过度时，立刻加入培养基终止胰酶对细胞的继续作用，加入培养基的量约为胰酶的1~2倍，然后离心去上清，加入新鲜培养基进行重悬，这时应该注意将细胞吹散，因为一般胰酶消化过度之后细胞容易聚集成团，若不吹散会严重影响细胞状态。由于胰酶消化造成细胞状态不好，可以继续培养，观察细胞状态，对于不能恢复良好状态的细胞，建议弃掉，不用于后续实验。根据不同细胞的特性，选择不同浓度的胰酶和消化时间，当首次用胰酶消化陌生细胞过度时下次需要适当缩短消化时间。

2. 培养液中需要加入双抗吗？

加不加双抗不是绝对的，视实际情况而定。如果实验室条件足够好，操作足够规范，尽量不要加双抗。相反，如果实验环境不够好，操作也没有绝对把握，还是有必要加双抗。最好的方法是做个实验对照，观察有没有必要加双抗。

3. 培养细胞时，如何避免细菌污染?

实验开展前打开紫外灯30min，操作时保持无菌操作，戴口罩，戴手套，喷适量酒精消毒，细胞培养液中可加入抗生素防止污染。

4.细胞培养过程中，细菌污染与真菌污染的特征是什么？

细菌污染后肉眼观察多为浑浊变黄，低倍镜下有细沙感，在高倍镜下能够观察到运动的细菌颗粒。真菌污染前期，肉眼观察培养基一般不会变黄浑浊，镜下可观察到菌丝并伴有聚团的死细胞。

5. 细胞培养中出现结晶的原因？

产生的结晶可能是细胞培养基中盐类物质结晶析出，对细胞的生长状态会产生影响。产生结晶的原因可能是：

（1）温度变化导致结晶的出现；

（2）培养基蒸发失水诱导浓度改变导致析出。

6. 培养细胞时出现了聚团现象是什么原因？

（1）在用胰酶消化细胞时，如果吹打不充分，贴壁后就会出现细胞聚团现象；

（2）在进行细胞铺板时，如果细胞分布不匀，细胞在后期分裂增殖期间就会出现聚团现象。遇到聚团现象时，将细胞消化下来，吹打成单独的细胞，再使用“十”字、“8”字方法多次摇匀，使细胞分布均匀；

（3）细胞密度在80~90%时，要及时传代，否则细胞长得太满也会聚团。

7. 怎么避免吹打细胞时出现一堆气泡？

选择合适的移液枪，液体较少时选择更小的枪头。吹打细胞时要注意力度，动作太重会出现气泡，吹打的时候移液枪里的培养基不要一次全都压出来，枪头要在液面以下。

8. 分泌型蛋白和胞内蛋白在蛋白转运过程中的区别以及原因?

分泌型蛋白由于含有能够定位到胞外的信号肽，从而将肽链经粗面内质网、高尔基体转运到胞外，而胞内蛋白含有能够定位到胞内细胞器的信号序列或不含有定位序列，使肽链定向转移到细胞器或留在细胞质中。