货号：CA1009

规格：1 mL

产品简介：

嘌呤霉素（Puromycin）是由白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）在发酵代谢过程中产生的氨基糖苷类抗生素，是氨酰-tRNA分子3’末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素同A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致翻译的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。能抑制蛋白质合成并而杀死动物和昆虫细胞以及革兰氏阳性菌、大肠杆菌等。

白黑链霉菌内发现的pac基因编码嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC），赋予机体对嘌呤霉素产生抗性。这一特性如今普遍应用于筛选特定携带pac基因质粒的哺乳动物稳定转染细胞株。嘌呤霉素在细胞稳转株筛选中的普遍应用与慢病毒载体携带pac基因特性有关。嘌呤霉素在特殊情况下可以用来筛选携带pac基因质粒的大肠杆菌菌株。

保存条件：

-30 ~-10 ℃保存，一年有效。

使用说明：

1.建议使用浓度

哺乳动物细胞：1~10 μg/mL，最佳浓度需要杀灭曲线来确定；

大肠杆菌：推荐使用浓度为125 μg/mL。注：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌稳转株需要精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身的影响。

2.溶解方法

用注射用水制成50 mg/mL的母液，经0.1 μm滤膜过滤除菌后分装于-20℃冻存；甲醇溶解亦可，配制成10 mg/mL的储存液。

3.嘌呤霉素杀灭曲线的确定（以shRNA转染或者慢病毒转导为例）

嘌呤霉素有效浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢情况及细胞所处细胞周期位置等有关。为了筛选到稳定表达的shRNA细胞株，确定杀死未转染/转导细胞的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次做实验的客户一定要建立适合自身实验体系的杀死曲线（kill curve）。