货号：CC1003

规格：100 μL×10

产品简介：

OrigamiB（DE3）属于大肠杆菌克隆型菌种，OrigamiB系列菌株同样具有Origami系列菌株含有的trxB/gor基因突变，但是该菌株是来源于BL21的lacZY基因突变株。所以，OrigamiB系列菌株是集合BL21，Tuner和Origami三种菌株的优点于一身。在thioredoxin reductase（trxB）和glutathione reductase（gor）基因上同时含有突变，这使得该菌株能够更加高效的在细胞质内生成二硫键，有助于含二硫键蛋白的活性蛋白形成。

TrxB和Gor基因突变使得质粒能够分别具有卡那和四环素抗性，所以本菌株无法用于卡那和四环素抗性质粒的蛋白表达。DE3是溶源性的2DE3，所以在lacUV5启动子下携带有T7 RNA聚合酶的染色体拷贝。该菌株适用于pET系列载体，及其他T7启动子系列载体。

OrigamiB（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌OrigamiB（DE3）菌株经特殊工艺制备得到，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，转化效率可达10⁸-10⁹，-80℃保存3-5个月转化效率不发生改变。

基因型：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm lacY1 ahpC(DE3)gor522:Tn10 trxB(Kan^R, Tet^R)

保存条件：

-80℃保存，一年有效。

使用说明：（以下操作均按无菌条件的标准进行）

1. 将感受态细胞置于冰上融化，以下实验以100 μL感受态细胞为例。

2. 向感受态细胞悬液中加入需转化的目的DNA，注意目的DNA的体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一，轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴放置30分钟。

3. 将离心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速转移到冰浴中放置2-3分钟，注意不要摇动离心管。

4. 向离心管中加入500 μL无菌无抗的SOC或LB培养基，37℃ 180 rpm振荡培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。

5. 取适量已转化的感受态细胞涂布含相应抗生素的SOC或LB平板，37 ℃倒置培养12-16小时。涂布用量可根据具体实验来调整，如转化的DNA总量较多，可取100 μL左右的转化产物涂板；反之，如转化的DNA总量较少，可取200-300 μL的转化产物涂板。过多菌液可以抑制细菌生长。如果预计的克隆较少，可通过离心后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事项：

1. 感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融，否则其转化效率将会降低。

2. 实验过程中应严格无菌操作，防止其它DNA或杂菌的污染，避免为以后的筛选、鉴定带来影响。

3. 转化时，转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。

4. 转化率的计算：转化率＝产生菌落的总数/铺板DNA总量。

5. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。