货号:EP1001
规格:1 mL
产品简介:
PEI MAX是一种功能强大,值得信赖且经济实惠的瞬时转染试剂,在HEK293和CHO大多数表达系统中,PEI都能提供稳定的高转染效率。与传统PEI 25K相比性能更加稳定,而且可以在两个小时内完成整个转染过程,相对于大多数转染试剂而言,PEI MAX既能实现高效转染,又能使转染成本降低最少40%。
适用范围:
适用于哺乳动物细胞的贴壁和悬浮转染。
保存条件:
4℃保存,一年有效。
使用说明:
1.接种细胞:转染前一天(24h左右),用胶原酶胰酶消化细胞并计数,细胞铺板,使其在转染时汇合度为70~90%;
2.准备DNA-PEI复合物:用一定体积的 Opti-MEM 或其他无蛋白培养基稀释质粒,小心混匀,记为A 液;用相等体积的 Opti-MEM 稀释PEI,小心混匀,记为B液,室温静止 5min。每1 μgDNA需用 0.5~2 μLPEI MAX。将 B 液缓慢滴加到 A 液中并混匀,边加边轻摇震荡混匀;
3.室温孵育 10~25 min;
4.转染细胞:将 DNA-PEI混合液缓慢加入到细胞培养基中,轻轻混匀。转染4h 后更换为新鲜培养基或提高培养液中血清浓度至15%;
5.37℃孵育细胞2 ~ 4天。然后分析转染细胞。
注意事项:
1. 转染前将试剂、DNA、培养基置于37℃预热备用;
2. 转染时较高的细胞密度可以得到更高的转染效率和表达水平,并能减少细胞毒性;
3. 对于HEK-293、NIH/3T3和COS细胞,转染前两天铺板可显著提高转基因表达水平,需要较低密度铺板使得转染前细胞汇合度仍为70%~80%;
4. 转染时一边轻轻涡旋装有DNA溶液的试管,一边将稀释的 PEI MAX 滴加至试管中(注意此步请勿颠倒添加顺序);
5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
质粒DNA转染的优化:
为达到最高的转染效率和降低细胞毒性的影响,可以对DNA和PEI MAX的比例以及细胞密度进行优化,一般在1:0.5~1:2的范围内优化DNA(μg)和PEI MAX的比例。
表1:不同细胞培养板中转染时培养基、核酸及PEI MAX用量:
细胞培养板 | 培养基用量 | DNA转染 | ||
铺板培养基用量 | 稀释培养基用量 | 质粒用量 | 试剂用量 | |
96-well | 100 μL | 2×25 μL | 0.2 μg | 0.3 μL |
24-well | 500 μL | 2×50 μL | 0.8 μg | 1.2 μL |
12-well | 1 mL | 2×100 μL | 1.6 μg | 2.4 μL |
6-well | 2 mL | 2×250 μL | 4 μg | 6 μL |
60-mm | 5 mL | 2×0.5 μL | 8 μg | 12 μL |
10-cm | 15 mL | 2×1.5 mL | 24 μg | 36 μL |
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